Nuôi cấy tinh trùng

Các tế bào dòng tinh được phân lập bằng collagenase IV và được nuôi cấy trong môi trường Gamete được bổ sung FSH với nồng độ 50 IU l-1 và testosterone với nồng độ 1mmol l-1, ở nhiệt độ 320C, nồng độ CO2 5%, trong thời gian 24 giờ.

Kết quả nghiên cứu cho thấy:

–        Collagenase IV có tác dụng tốt đối với quá trình phân lập các tế bào dòng tinh.

–        Số lượng tinh tử đang kéo dài, tinh tử đã kéo dài và tinh trùng tăng, trong khi đó số lượng tinh tử tròn giảm sau 24h nuôi cấy.

–        Tỷ lệ tinh trùng và tinh tử đã kéo dài di động tăng đáng kể sau nuôi cấy.

–        Có thể tạo được phôi với tinh trùng thu được sau nuôi cấy nhờ kỹ thuật vi tiêm.

I. Đối tượng và phương pháp nuôi cấy:

1. Đối tượng nghiên cứu

1.1. Cỡ mẫu: bao gồm 30 bệnh nhân được chẩn đoán azoospermia tại Trung tâm Công nghệ phôi – Học viện Quân y

1.2. Tiêu chuẩn lựa chọn bệnh nhân:

–        Bệnh nhân có xét nghiệm nhiễm sắc thể bình thường

–        Sau khi tiến hành phương pháp PESA hoặc MESA, các bệnh nhân được xác định không có tinh trùng tại mào tinh.

–        Không tiến hành nuôi cấy các trường hợp chỉ có tế bào Sertoli trong ống sinh tinh (hội chứng chỉ có tế bào Sertoli).

II. Kết luận:

Qua nghiên cứu, bước đầu chúng tôi có thể kết luận như sau:

–        Collagenase IV có khả năng phân lập các tế bào dòng tinh hiệu quả

–        Tỷ lệ di động của tinh trùng và tinh tử đã kéo dài tăng cao ở thời điểm 24h sau nuôi cấy.

–        Các tinh tử có khả năng biệt hoá trong môi trường Gamete, ở 320C, trong bóng tối.

–        Tinh trùng thu được sau 24h nuôi cấy có khả năng thụ tinh để tạo thành phôi.

III. Điều kiện để cấy tinh trùng:

Khi đã xác định vô sinh do không có tinh trùng, các bác sĩ sẽ tiến hành nuôi cấy tinh tử của người bệnh thành tinh trùng (bộ nhiễm sắc thể không thay đổi mà chỉ biến đổi về hình thể dạng tròn không có đuôi để thành dạng bầu dục, đuôi ngắn). Lúc này, tinh tử sẽ có khả năng thụ tinh nếu tiêm vào trứng của người vợ. Thời gian nuôi cấy trong vòng 24 giờ. 

Tuy vậy, các bệnh nhân phải đạt 3 tiêu chuẩn mới có thể được chấp nhận điều trị:

–        Có rối loạn sinh tinh đến giai đoạn hình thành tinh tử.

–        Sức khoẻ tốt, không mắc các bệnh di truyền, truyền nhiễm (HIV, viêm gan B…).

–        Được khám, chẩn đoán, xét nghiệm và dùng thuốc kích thích sinh tinh từ 3 – 18 tháng.

Ở một số nam giới có thể có rối loạn quá trình sinh tinh nên không thể sản sinh ra tinh trùng. Quá trình sinh tinh ở nam giới từ 2 – 3 tháng phải theo 5 bước: tinh nguyên bào, tinh bào 1 và 2, tinh tử, tinh trùng. Tinh tử chính là các tinh trùng non nhưng chưa có đuôi nên không thể chuyển động và dịch chuyển vào buồng trứng để thụ thai.